卸妝油皮膚刺激性斑貼試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范：從動(dòng)物模型到人體評(píng)價(jià)的全流程風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

一、試驗(yàn)設(shè)計(jì)與受試物制備

（一）受試物濃度與對(duì)照組設(shè)置

受試物處理：

1.原液組：未稀釋卸妝油（含油脂、表面活性劑及防腐劑）；

2.稀釋組：50%卸妝油（去離子水按1:1體積比稀釋），評(píng)估濃度依賴性刺激；

3.陽性對(duì)照：0.5%十二烷基硫酸鈉（SDS）水溶液（已知中度刺激）；

4.陰性對(duì)照：去離子水（無刺激性）12。

賦形劑與貼片選擇：

1.貼片類型：無紡布圓形貼片（直徑8 mm，面積0.5 cm2），每片負(fù)載0.2 mL受試物；

2.固定方式：低致敏醫(yī)用膠帶（3M Micropore），避免膠帶直接接觸皮膚引發(fā)刺激；

3.封閉性：使用鋁箔覆蓋貼片（封閉式斑貼），確保受試物與皮膚充分接觸3。

（二）動(dòng)物模型與人體志愿者選擇

動(dòng)物模型：

1.物種：新西蘭白兔（雌性，體重2.0-2.5 kg），每組3只；

2.皮膚準(zhǔn)備：背部脫毛（面積5 cm×10 cm），脫毛后24小時(shí)檢查皮膚完整性（無劃痕、紅斑）；

3.適應(yīng)期：實(shí)驗(yàn)室環(huán)境適應(yīng)5天（溫度23±2℃，濕度50±10%）4。

1.納入標(biāo)準(zhǔn)：18-65歲健康成人，皮膚類型Ⅰ-Ⅳ型（Fitzpatrick分類），近3個(gè)月未使用糖皮質(zhì)激素；

2.排除標(biāo)準(zhǔn)：敏感肌、特應(yīng)性皮炎史、妊娠哺乳期女性，樣本量≥20人（滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求）5。

二、標(biāo)準(zhǔn)操作流程與觀察指標(biāo)

（一）動(dòng)物斑貼試驗(yàn)步驟

貼片施加：

1.每只兔背部對(duì)稱放置4個(gè)貼片（原液、稀釋液、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照），間距≥2 cm；

2.輕壓貼片確保無氣泡，使用彈性繃帶固定，防止動(dòng)物抓撓。

暴露與移除：

1.暴露時(shí)間：24小時(shí)；

2.移除后處理：用溫水輕柔清洗殘留受試物，避免摩擦刺激；

3.觀察時(shí)間點(diǎn)：移除后30分鐘（急性反應(yīng)）、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)（延遲反應(yīng)）2。

（二）Draize評(píng)分體系

反應(yīng)類型評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（動(dòng)物模型）評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（人體模型）

紅斑無（0）、輕微可見（1）、中度（2）、重度（3）、焦痂（4）無（0）、輕微（1）、明顯（2）、重度（3）

水腫無（0）、輕微（1）、中度（2）、重度（3）無（0）、輕微（1）、明顯（2）、重度（3）

總分紅斑分+水腫分（最高7分）原發(fā)性刺激指數(shù)（PSI）=（紅斑發(fā)生率+水腫發(fā)生率）/2

（三）人體斑貼特殊觀察指標(biāo)

1.主觀癥狀：瘙癢、灼熱感（視覺模擬評(píng)分法VAS 0-10分）；

2.皮膚反應(yīng)持續(xù)時(shí)間：記錄紅斑/水腫消退時(shí)間，超過72小時(shí)提示潛在慢性刺激；

3.重復(fù)激發(fā)試驗(yàn)：對(duì)弱陽性結(jié)果（PSI 0.5-1.9）者，2周后再次貼片確認(rèn)反應(yīng)重現(xiàn)性5。

三、結(jié)果判定與風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)

（一）刺激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

動(dòng)物試驗(yàn)總分（Draize）人體PSI值刺激強(qiáng)度風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)

0-0.4＜0.5無刺激低風(fēng)險(xiǎn)

0.5-1.90.5-1.9輕度刺激中風(fēng)險(xiǎn)

2.0-4.92.0-3.9中度刺激高風(fēng)險(xiǎn)

≥5.0≥4.0重度刺激ji高風(fēng)險(xiǎn)

（二）體外替代試驗(yàn)驗(yàn)證

EpiDerm™重組人表皮模型：

1.操作步驟：受試物暴露15分鐘→PBS清洗→MTT染色→檢測(cè)570 nm吸光度；

2.判定標(biāo)準(zhǔn)：相對(duì)細(xì)胞活力≥50%為無刺激，與動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果一致性85%6。

3D皮膚模型優(yōu)勢(shì)：

無需動(dòng)物倫理審批，試驗(yàn)周期縮短至48小時(shí)，可評(píng)估香精、防腐劑等成分的協(xié)同刺激作用7。

四、影響因素與試驗(yàn)優(yōu)化

（一）關(guān)鍵影響因素

1.皮膚完整性：動(dòng)物脫毛時(shí)避免刮傷（可采用化學(xué)脫毛劑硫化鈉，濃度8%）；

2.貼片停留時(shí)間：人體模型48小時(shí)暴露比24小時(shí)更易檢出延遲性刺激（如甲醛釋放體）；

3.環(huán)境濕度：高濕度（＞60%）可能增強(qiáng)水溶性成分的滲透，建議控制在50±5%3。

（二）配方優(yōu)化建議

刺激性成分替代：用苯氧乙醇（≤1%）替代甲基異噻唑啉酮，降低防腐劑刺激風(fēng)險(xiǎn)；

油脂體系調(diào)整：增加霍霍巴油（20%-30%）可緩解表面活性劑對(duì)皮膚屏障的破壞；

pH值控制：調(diào)節(jié)至5.5-7.0（接近皮膚pH），減少酸堿刺激1。

五、法規(guī)要求與報(bào)告撰寫

（一）法規(guī)依據(jù)

中國(guó)：《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2022年版）第四章皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)；

歐盟：EC 1223/2009法規(guī)，要求對(duì)新原料進(jìn)行體外替代試驗(yàn)；

美國(guó)：FDA化妝品自愿注冊(cè)計(jì)劃（VCRP）

（二）報(bào)告核心內(nèi)容

1.受試物信息（成分、濃度、批號(hào)）；

2.試驗(yàn)設(shè)計(jì)（模型選擇、樣本量、對(duì)照組）；

3.原始數(shù)據(jù)（紅斑/水腫照片、評(píng)分記錄）；

4.結(jié)論與建議（如“本品為輕度刺激，建議添加舒緩成分"）。

關(guān)鍵詞：卸妝油；皮膚刺激性；斑貼試驗(yàn)；Draize評(píng)分；重組人表皮模型

參考文獻(xiàn)

[1] 《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2022年版）[S]. 國(guó)家藥監(jiān)局.

[2] OECD Test No. 404 皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)[S]. 2015.

[3] SCCS Guidance on Dermal Irritation Testing[S]. 2021.